多指标联合检测在丙型肝炎诊断中的应用

宿振国1,刘义庆2,卢志明2,周玉明1

( 1.滨州医学院附属医院, 山东 滨州 256603; 2. 山东大学附属省立医院)

本研究拟探讨在丙型肝炎诊断中丙型肝炎病毒抗体( HCVAb)联合丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)、HCV 核心抗原( HCVcAg ) 和丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测的临床应用价值。

1 资料与方法

1. 1  临床资料  选取2007年1- 12 月我院住院及门诊患者血清及血浆样本520 份,其中男300 份, 女220份;年龄13- 79 岁, 平均年龄 47. 7 岁。所有病例选择均符合2004 年中华医学会传染病与寄生虫病学分会指定的病毒性肝炎防治方案中的诊断标准[1],并排除合并感染其他病毒性肝炎,排除心、 脑、肾、 肺等器官疾病及高血压、 糖尿病等。

1. 2  实验方法

1. 2. 1 HCVRNA 定量检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应( FQ-PCR) ,仪器为Corbett 公司的Rotor Gene 3000仪,定量试剂由深圳匹基生物工程有限公司提供。由操作人员按操作说明书进行检测。检测结果大于1. 0  103IU / ml 为阳性。阳性结果重复测定两次。

1. 2. 2 抗HCV 检测 抗HCV( ELI SA) 第三代试剂盒,由北京万泰生物药业股份有限公司提供。由操作人员按操作说明进行检测。临界值( cut of f )确定:阳性对照每孔 OD 值 0. 5, 阴性对照孔 OD 值<0.08 时,测定结果有效,其临界值( cut off) 为:阴性对照孔平均OD 值+ 0. 12。结果判定: 待检测样品的OD 值临界值判定为HCV 抗体阳性, < 临界值判定为HCV 抗体阴性。阳性结果重复测定两次。

1. 2. 3  HCV核心抗原检测 由山东莱博生物科技有限公司提供的丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒,临界值( cut off)确定:阳性对照每孔OD 值> 0.6,阴性对照孔OD 值< 0. 1 时,测定结果有效,其临界值( cut of f) 为:阴性对照孔平均OD 值+ 0. 06。结果判定:待检测样品的OD值临界值判定为HCV 抗原阳性, < 临界值判定为HCV 抗原阴性。阳性结果重复测定两次。

1. 2. 4  ALT 定量检测 采用日本OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪和试剂,按操作说明检测。ALT> 40 U/L 为阳性, ALT  40 U/ L 为阴性。阳性结果重复测定两次。

1. 3  统计学方法 实验数据采用SPSS13. 0 统计软件进行统计学处理, 计数资料比较进行 2检验, P< 0. 05为差异有统计学意义。

2  结果

2. 1  520例丙型肝炎患者中, HCAb 阳性 416 例(占80. 0% ) , HCVRNA 阳性 262 例( 占 50. 4% ) , 两者双阳性率为 61. 5%, HCVAb 与HCVRNA 阳性率有显著差异( P < 0. 01) , 经相关性分析, HCVAb 与HCVRNA 阳性率之间呈正相关( r = 0. 408, P <0.01) ,说明HCVAb 与HCVRNA 同时检测可提高对丙型肝炎的诊断( 见表1)。

2. 2  520例丙型肝炎患者中, HCVAb 阳性 416 例(占80. 0% ) , HCV cAg 阳性 242 例( 占46. 5% ) , 两者双阳性率为54. 8% , 两者HCVAb 与HCVcAg 阳性率有显著差异( P < 0. 01) ,经相关性分析, HCVAb与HCVcAg阳性率之间呈正相关( r = 0. 332, P <0.01) ,说明HCVAb 与HCVcAg 同时检测可提高对丙型肝炎的诊断(见表1)。

2. 3  520例丙型肝炎患者中,HCVAb( + ) 416 例( 占80% ) ,ALT 阳性 234 例(占 45. 0%) , 两者双阳性率为51. 0% ,HCVAb 与ALT 阳性率有显著差异( P <0. 01) , 经相关性分析, HCVAb 与ALT 阳性率之间呈正相关( r = 0. 240, P < 0. 01) , 说明HCVAb 与AL T 同时检测可提高对丙型肝炎的诊断(见表1) 。

表1  HCV Ab与 HCV RNA、 HCV cAg、 ALT 阳性率的关系抗体分组 例数 HCVRNA

+ -HCV c Ag+ -ALT+ -HCV Ab( + ) 416 252 164 228 188 212 204HCV Ab( - ) 104 10 94 14 90 22 82P 值 P < 0. 01 P< 0. 01 P < 0. 01

3  讨论

人感染HCV 后,存在一个相当长时间的病毒血症阳性,血清抗体阴性,这一段时间称为检验窗口期, HCV 在体内复制活跃,传染性很强。聚合酶链技术( PCR) 应用于检测HCV RNA, 也可以极大地缩短窗口期, 检测HCV RNA 具有高度灵敏度和特异性。我们在104例抗体阴性的血清中检出10 例HCVRNA 阳性, 可能与标本中病毒复制不活跃,被检者免疫功能低下,产生抗体很少, 或者处于血清阳转的窗口期等[2],ELISA 法无法检出HCVAb。这时补充HCVRNA 检测,可以缩短窗口期, 有利于HCV 的早期诊断。应用ELISA 法早期检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)可以克服抗HCV ELISA 筛选的局限从而达到缩短窗口期的目的, 也是降低HCV 感染的有效途径之一。本文数据显示416 份HCVAb 阳性血清和104份HCV Ab 阴性血清HCV cAg检出率差异有统计学意义( P < 0. 01) ,提示检测HCVcAg 具有一定的特异性。丙型肝炎病毒感染的患者在感染后 1- 4 周内血清HCVRNA 转阳, 同时HCVcAg 出现,随后ALT 增高和HCV 抗体转阳[3]抗HCV 抗体不同于其他抗体,它不是一种保护性抗体,临床上把它作为感染的证据, 但由于免疫功能的差异,部分患者感染后出现抗HCV 较晚,特别是免疫功能低下者或免疫抑制剂治疗的患者可能不产生抗HCV 抗体。急性期的检出率低,部分病例可出现假阴性。故通过检测HCVcAg, 可以缩短病毒感染窗口期, 有助于筛查和早期诊断。在本研究结果中, 发现104 份抗体阴性标本中检出抗原阳性14 份, 证明抗原检测在一定程度上可以弥补抗体检测的不足, 更有效地控制HCV 的传播。丙氨酸氨基转移酶( ALT) 简称转氨酶, 在氨基酸代谢中有重要作用, 它是最常见的肝功能检查项目。它主要分布在肝脏, 其次是骨骼肌、 肾脏、 心肌等组织。由于 ALT 在肝细胞中的浓度比血清高7000 倍,而且大部分都位于肝细胞的细胞浆中, 当肝细胞受损时, 肝细胞膜通透性增加, ALT 升高, 因此,它也是肝细胞损伤最敏感的指标之一。

本文数据研究显示, 416 例HCVAb 阳性血清有204 份ALT未升高, 这可能是机体免疫力较强产生较多的抗体而病毒并没有对肝细胞造成损伤, 机体处于一种应答平衡状态所致; 104 例HCVAb 阴性血清有 22 例ALT 升高可能是急性丙型肝炎早期,机体产生的抗体很少但病毒已经对肝细胞造成较多损伤有关。

总之,HCVAb、 HCVRNA、 HCVcAg 和ALT 的联合检测己成为HCV 感染诊断的主要指标,扩大了检测范围,缩短了窗口期, 有利于早期诊断, 同时对这些指标的出现与消退规律、 及其与临床病理演变关系的追踪观察分析将对HCV 感染情况、 治疗方案的选择和预后判断等提供依据,有更直接的意义。

参考文献:

[ 1]中华医学会肝病学分会, 中华医学会传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J] . 中华肝脏病杂志, 2004, 12: 194.

[ 2]Echevarria JM,Avellon A, J onas G, et al. Sensitivi ty of a modif i ed versi onof the ARCHITECT Ant i HCV t es t in detec t ing samples with immunoblot confirmed, low l evel ant ibody to hepatitis C virus[ J] . J Clin Virol, 2006,35(4) : 368.

[ 3]中华医学会传染病学会. 病毒性肝炎防治方案[ J] . 中华传染病杂志, 2001, 19: 56.