李传平，温锦江，张金辉，陶胜来

  【摘要】  目的  观察自抽取血样至PCR检测HCV-RNA含量，在不同时间对检出率的影响。方法  93例丙型肝炎血标本，在采集后，放置3℃～4℃贮存，分6个时间段，应用实时荧光定量基因广增仪检测HCV-RNA含量。结果  1h内98.92%，2h内97.85%，3h内71.6%，4h内70.89%，8h内69.66%，72h以上69.44%。结论  血样放置时间长短，对HCV-RNA检测结果有明显影响。

    【关键词】  放置时间；  丙型肝炎；  病毒；  基因扩增

    我科在丙型肝炎诊治过程中，发现了PCR-HCV-RNA检测结果与临床疗效不符，而与血样采集后放置时间的长短有关。为验证血样放置时间长短对检测结果的影响，从2003年4月～2005年6月对在本科诊治的93例丙型肝炎血清，分别在采集1h、2h、3h、4h、8h、72h进行RNA检测，观察检测时间对检测结果的影响程度。

    1  材料与方法

    1.1  实验材料  标本来自2003年4月～2005年6月在我科诊治的93例丙型肝炎血清（诊断符合2000年西安会议修订的肝炎诊断标准）［1］，病毒含量＞8.0×103copies/ml（参考值＜8.0×103copiesml）。

    1.2  仪器和试剂

    1.2.1  仪器  日本大和FQD-33A荧光定量PCR仪。

    1.2.2  试剂  由中山大学达安基因诊断中心提供。

    1.3  实验方法  （1）负压抽取静脉血，放3℃～4℃贮存。（2）RNA提取和扩增按试剂说明书和仪器规程执行。

    2  结果

    标本采集至检测，1h内98.92%（92/93），2h内97.85%（91/93），3h内71.6%（58/81），4h内70.89%（56/79），8h内69.66%（62/89），72h以上69.44%（50/72）。上述结果经统计学处理分析证实检测阳性率2h内与2h以上差异有显著性P＜0.01，3h以上各时间段检测阳性率差异无显著性，P＞0.05。

    3  讨论

    丙型肝炎病毒（HCV）的持续感染，长期的慢性肝细胞坏死、再生，易形成肝硬化，可促进肝细胞癌变［2］。及早地发现和有效的诊治是减少肝硬化和肝癌的有力措施。丙型肝炎病毒RNA是反映HCV感染、复制的最直接、可靠的指标，在确诊丙型肝炎和筛选献血员；在评价治疗丙型肝炎药物疗效与预后判断方面，HCV-RNA的检测具有至关重要的作用。但HCV-RNA十分脆弱，易被降解，PCR-HCV-RNA检测灵敏度高，易造成假阳性和假阴性结果［3］，给临床工作造成误导。本文研究表明，标本能否正确反映机体真实情况，除完善的实验室条件外，与标本的待检时间有密切关系。标本在采集2h内检测阳性率最高，与2h以上差异有显著性，P＜0.01。我国是一个欠发达国家，丙肝病毒感染率较高，又多无症状，准确了解机体真实情况，能为临床诊断、预防、治疗提供可靠依据。丙型肝炎病毒RNA的检测应现采现做，应以抽血到RNA检测不超过2h为佳。

    【参考文献】

    1  病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，2001，19：56-62.

    2  蒋道荣，姚登福.急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析.中华肝病杂志，2000，8：155.

    3  王露楠，李金明.2000～2002年丙型肝炎病毒核酸逆转录聚合酶链反应测定室间质量评价.中华检验医学杂志，2003，26：778-779.