ＨＣＶ核心抗原测定与ＨＣＶ抗体测定的比较分析

黄菲 甘新宇

成都军区总医院输血科（成都 ６１００８３）

摘要  目的  探讨ＨＣＶ核心抗原检测与ＨＣＶ抗体检测在测定献血号ＨＣＶ感染上的差异。方法  将３６００名部队献血员的血清标本分别用两种ＥＬＩＳＡ试剂盒进行ＨＣＶ核心抗原及ＨＣＶ抗体检测，任一方法结果阳性者用荧光定量ＰＣＲ进行确诊。结果  用ＨＣＶ核心抗原检测方法检出的阳性标本数与用ＨＣＶ ＲＮＡ检测方法确诊阳性标本数相符。结论  以ＨＣＶ核心抗原检测代替ＨＣＶ抗体检测是提高献血员ＨＣＶ检出率的较为理想的方法。

关键词  ＨＣＶ；核心抗原；抗体

丙型肝炎是后果最严重的输血传播疾病之一。血站为了尽可能保证安全输血，对献血员采用两种不同试剂进行两次ＥＬＩＳＡ方法的抗ＨＣＶ检测。在实际工作中，笔者发现漏检标本仍然存在。为了避免这种情况继续发生，国外已广泛开展对献血员进行ＨＣＶ ＲＮＡ检测。但由于价格昂贵，不能在我国普及应用。我们用ＨＣＶ核心抗原测定方法和ＨＣＶ抗体测定方法分别对我血站３６００名献血员进行ＨＣＶ感染检测筛查，任一方法结果阳性者用荧光定量ＰＣＲ进行确诊，从而分析这两种方法在测定ＨＣＶ感染上的差异，现报告结果如下。

１  材料与方法

１．１  血清标本 

我血站２００４年度至２００５年度３６００份献血员血清标本。

１．２  试剂 

ＨＣＶ核心抗原测定采用Ｏｒｔｈｏ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ公司ＨＣＶ核心抗原检测双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ试剂盒。ＨＣＶ抗体测定采用北京吉比爱公司ＨＣＶ抗体检测ＥＬＩＳＡ试剂盒。ＨＣＶ　ＲＮＡ检测用Ｒｏｃｈｅ公司ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ荧光定量ＰＣＲ试剂盒，最大灵敏度为５００ｃｐ／ｍｌ。结果判断：≥１×１０３ｃｐ／ｍｌ为阳性，＞１×１０３ｃｐ／ｍｌ为阴性。

１．３  仪器 

　　ＥＬＩＳＡ检测的主要仪器：Ｌａｂａｔ２全自动加样系统（美国Ｈａｍｉｌｔｏｎ公司）、Ａｎｔｈｏｓ３多功能控温孵育酶标仪（奥地利Ａｎｔｈｏｓ  ｌａｂｔｅｃ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）、Ａｎｔｈｏｓ  ｆｌｕｉｄｏ洗板机（奥地利Ａｎｔｈｏｓ公司）。ＰＣＲ检测的主要仪器：ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ荧光ＰＣＲ仪（德国Ｒｏｃｈｅ公司）、Ｂ１６高速离心机。

１．４         方法

ＥＬＩＳＡ检测操作严格按说明书进行，所采血样离心后用Ｌａｂａｔ２加样，每块酶标板均在Ｈ１至Ｈ６位置分设空白、质控、阴性和阳性对照，然后进行孵育、洗板、加酶、显色、终止、读板、打印结果及统计分析ＯＤ值。ＨＣＶ　ＲＮＡ检测操作按试剂盒说明书进行，扩增条件为９４℃预变性１ｍｉｎ，然后５５℃１ｍｉｎ，７２℃ ２ｍｉｎ，共３０个循环，反应结束后，由电脑自动分析计算结果。

２  结  果

３６００名献血者中，ＨＣＶ核心抗原检测为阳性的有１５例，ＨＣＶ抗体检测为阳性的有１１例，且这１１例包括在前１５例中，对这１５例血清行荧光定量ＰＣＲ检测，结果均为阳性。见表１。表１  不同方法检测ＨＣＶ感染的情况（略）

３  讨  论

    ＨＣＶ核心抗原是由ＨＣＶ基因组中最为保守的部分编码而来，不同基因型的ＨＣＶ其核心抗原保持不变。有研究表明，患者外周血中ＨＣＶ核心抗原与ＨＣＶ ＲＮＡ水平具有良好的相关性，ＨＣＶ核心抗原阳性者，表明有ＨＣＶ ＲＮＡ感染［１］。ＨＣＶ抗体为感染ＨＣＶ后的患者外周血中产生的与病毒抗原相对应的抗体。当健康人群感染上ＨＣＶ后，在最初一段时间内，患者体内并不立即产生抗体，而是要经过一定的时期，这一时期即为ＨＣＶ感染的“窗口期”。当ＨＣＶ病毒进行大量复制，逐步产生的抗体量增加到可以检测出时，大约要经过８２天［２］。因此在“窗口期”进行ＨＣＶ抗体检测并不能反映ＨＣＶ感染的真实情况。对于处于ＨＣＶ感染“窗口期”的献血员，此时进行抗ＨＣＶ检测，结果为阴性，而使阳性血液误定为阴性，给受血者带来危害。

实验结果表明，１５例ＨＣＶ核心抗原阳性血样中，只有１１例抗ＨＣＶ阳性，而这１５例ＨＣＶ核心抗原阳性血样经荧光定量ＰＣＲ确诊，均为阳性。这说明，未检测出抗ＨＣＶ的另４例，很有可能就是处于“窗口期”的献血员。而通过对献血员进行ＨＣＶ核心抗原的检测，就能够缩短“窗口期”的时间，尽量提前检测出ＨＣＶ感染的情况，从而减少医源性丙型肝炎的发生和传播。笔者认为，在ＰＣＲ检测难以普遍推广的情况下，以ＨＣＶ核心抗原检测代替ＨＣＶ抗体检测是提高献血员ＨＣＶ检出率，增强临床输血的安全性的较为理想的方法。

参考文献：

１．Ｎｕｂｌｉｎｇ  ＣＭ，Ｕｎｇｅｒ  Ｍ，Ｃｈｕｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＨＣＶ  ｃｏｒｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  ＨＣＶ  ＲＮＡ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅａｒｌｙ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００２，４２（８）：１０３７～１０４５．

２． 李执如，周琼秀．日本进行ＨＣＶ、ＨＢＶ和ＨＩＶ病毒核酸筛查的现状［Ｊ］．国外医学输血及血液学分册．２００３，２６（２）：１８３～１８５．